دانلود مقاله اثر مهاری گابا بر ترشح انسولین تحریک شده توسط گلوکز از جزایر لانگرهانس جدا شدهی پانکراس موش صحرایی فایل ورد (word)
دانلود مقاله اثر مهاری گابا بر ترشح انسولین تحریک شده توسط گلوکز از جزایر لانگرهانس جدا شدهی پانکراس موش صحرایی فایل ورد (word) دارای 9 صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است
فایل ورد دانلود مقاله اثر مهاری گابا بر ترشح انسولین تحریک شده توسط گلوکز از جزایر لانگرهانس جدا شدهی پانکراس موش صحرایی فایل ورد (word) کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه و مراکز دولتی می باشد.
این پروژه توسط مرکز مرکز پروژه های دانشجویی آماده و تنظیم شده است
توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی دانلود مقاله اثر مهاری گابا بر ترشح انسولین تحریک شده توسط گلوکز از جزایر لانگرهانس جدا شدهی پانکراس موش صحرایی فایل ورد (word) ،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد
بخشی از متن دانلود مقاله اثر مهاری گابا بر ترشح انسولین تحریک شده توسط گلوکز از جزایر لانگرهانس جدا شدهی پانکراس موش صحرایی فایل ورد (word) :
مقدمه
تنظیم ترشح انسولین از سلولهای بتا میتواند از راههای متفاوتی از جمله تغییر غلظت گلوکز خون، هورمونهای مختلف و میانجیهای عصبی انجام شود که مسیر انتقال پیام درونسلولی هر کدام متفاوت است.2،1 در سالهای اخیر تنظیم پاراکرین فعالیت سلولهای B مورد تأکید قرار گرفته
است. از جمله ترکیباتی که به عنوان عامل پاراکرین و
اتوکرین در تنظیم فعالیت سلولهای B پیشنهاد شده، گاما آمینو بوتیریک اسید (GABA) است. گابا به طور عمده در نورونها و سیستم عصبی مرکزی (CNS)4،3 که اثر مهاری
دارند، یافت میشود اگرچه در برخی بافتها اثر تحریکی آن نیز گزارش شده است.5 وجود این میانجی در بافتهای دیگر مانند پانکراس نیز گزارش شده است.6 مطالعههای ایمنوسیتوشیمی نشان داده که گابا و آنزیم سنتزکنندهی آن یعنی گلوتامات دکربوکسیلاز (GAD) در سلولهای B و
06 مجلهی غدد درونریز و متابولیسم ایران دورهی دهم, شمارهی 1، اردیبهشت 7831
همچنین سلولهای A وجود دارد.21-7 مشخص شده که گابا در CNS دارای سه نوع رسپتور میباشد که دو نوع رسپتور آن جزء گیرندههای مؤثر آیونورسپتورها ( GABAA,
(GABAC و نوع دیگر جزء متابورسپتورها (GABAB) است.41،31 وجود رسپتورهای GABAB و همچنین بیان ژن
آن در سلولهای بتا نیز به اثبات رسیده است.51 گابا و انسولین با تحریک سلولهای بتای پانکراس توسط گلوکز از سلولهای B به طور همزمان آزاد میشوند.61 یافتهها در
مورد اثر تنظیمی گابا بر ترشح انسولین متناقض هستند. برخی گزارشها نشان دادهاند که گابا ترشح انسولین و گلوکاگون را کاهش میدهد.71 مطالعهای که روی پانکراس پرفیوز شدهی موش صحرایی و سگ انجام شد، نشان داد که گابا موجب کاهش ترشح انسولین میشود،91،81 در حالی که مطالعههای دیگر پیشنهاد میکنند که گابا روی ترشح انسولین در پانکراس پرفیوژ شده موش صحرایی اثری ندارد.11،3 در رابطه با مکانیسم اثر گابا روی سلول B نیز
توافق کاملی وجود ندارد. برخی مطالعهها گزارش کردهاند که گابا از طریق رسپتور GABAB اثر میکند.02 در حالی که بیان ژن رسپتور GABAA نیز در سلولهای B گزارش شده
است.12
با توجه به این که هنوز اثر GABA در ترشح انسولین
قطعی نشده است، مطالعهی حاضر با هدف بررسی اثر گابا روی ترشح انسولین از جزایر لانگرهانس تحریک شده توسط گلوکز و اثر آگونیست (باکلوفن) و آنتاگونیست (ساکلوفن) اختصاصی رسپتور GABAB انجام شد.
مواد و روشها
در این مطالعه از 54 سر موش صحرایی نر نژاد ویستار در محدودهی وزن 052-002 گرم تهیه شده از حیوانخانهی دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا; (عج) استفاده شد. حیوانات در شرایط دمای 2±22 درجهی سانتیگراد و چرخهی نوری 21 ساعت نور و 21 ساعت تاریکی در حیوانخانهی پژوهشکدهی غدد درونریز و متابولیسم نگهداری شدند. حیوانات به آب و غذا (خوراک موش تهیه شده از شرکت خوراک دام پارس، ایران) دسترسی آزاد داشتند.
برای جداسازی جزایر لانگرهانس از تکنیک هضمی کلاژناز استفاده شد.22 به طور خلاصه، پس از بیهوشی با اتر، سر حیوان جدا و پس از تخلیهی کامل خون از بدن
ناحیهی شکم باز شد. پس از مسدود کردن محل ورود مجرای مشترک صفراوی به دوازدهه از طریق یک کاتتر باریک (شمارهی 81) 01 میلیلیتر محلول نمکی هنکس i(HBSS) سرد )]کلریدسدیم 631، کلریدپتاسیم 63/5، کلرید
کلسیم 62/1، سولفات منیزیم 18/0، فسفاتدیسدیم هیدروژن 33/0، فسفات دیهیدروژن پتاسیم 44/0 و بیکربنات سدیم 61/4 (بر حسب میلیمول)[32 حاوی 5/0 میلیگرم در میلی لیتر کلاژناز P – (شرکت Roche، آلمان) به
داخل مجرای مشترک صفراوی تزریق شد.42 با تزریق محلول حاوی کلاژناز، پانکراس متسع شده بلافاصله از بدن حیوان خارج و پس از جدا کردن بافتهای چربی و غدد لنفاوی، به درون لولهی فالکون پلاستیکی که حاوی 5 میلیلیتر هنکس و کلاژناز منتقل و به مدت 71 دقیقه در دمای 73 درجه سانتیگراد در بنماری قرار داده شد.52 در انتهای زمان انکوباسیون، محتویات لوله با استفاده از هنکس سرد به حجم نهایی 53 میلی لیتر رسانده و لوله به مدت 1 دقیقه با دست تکان داده شد. محتویات به داخل کریستالیزور (حجم051 میلیلیتر) منتقل، هنکس سرد تا لبهی کریستالیزور اضافه و محتویات کریستالیزور به آرامی مخلوط شد. پس از گذشت 09 ثانیه، محلول فوقانی توسط ساکشن تخلیه و عمل شستشو 2 بار دیگر تکرار میشد. سوسپانسیون نهایی از صافی (با منافذ 005 میکرومتر) عبور داده شده، دوباره با هنکس سرد شسته شد. رسوب باقی مانده که حاوی جزایر لانگرهانس جدا شده است درون سینی یخ قرار داده شد و با استفاده از استریو میکروسکوپ ( Kyowa مدل-SDZ-TR PL، ژاپن) و به کمک پیپت پاستور شیشهای جزایر جدا و به
درون پتری دیش دیگری منتقل شد.62
با استفاده از پیپت پاستور زیر استریومیکروسکوپ هشت عدد از جزایر جدا و به هر یک از کاپهای واقع در سینی یخ منتقل شد. پس از خارج کردن محلول هنکس به کاپهای حاوی جزایر، 1 میلی لیتر محلول کربس ]حاوی کلرید سدیم (511)، کلرید پتاسیم (5)، کلرید منیزیم (1)، کلرید کلسیم (5/2)، بیکربنات سدیم (42) (شرکت Merck، آلمان)
HEPES 61 (شرکت Sigma، امریکا) (بر حسب میلیمول) و 5/0 گرم در دسیلیتر آلبومین گاوی (شرکت Sigma،
امریکا)[ اضافه شد.72 محلول کربس در آزمایشهای مختلف
دارای غلظتهای مختلف گلوکز و آگونیستها و
i- Hank’s Balanced Salt Solution
فرزانه فرجی و همکاران اثر مهاری گابا بر ترشح انسولین 16
آنتاگونیستهای گابا (گابا، باکلوفن و ساکلوفن) (شرکت Sigma، امریکا) بود (گلوکز، گابا، آگونیست و آنتاگونیست
گابا همزمان اضافه شدند). کاپها به محفظهی شیشهای که درب آن توسط درپوش پلاستیکی بسته میشد منتقل و در حمام 73 درجهی سانتیگراد انکوبه شدند و در پنج دقیقهی اول انکوباسیون جزایر در معرض گاز کربوژن (59% اکسیژن و 5% گاز کربنیک) قرار گرفتند. بعد از پایان مدت انکوباسیون که برای آزمایشهای مختلف مدت آن متغیر بود ( 01، 02، 04، 05، 06 و 09 دقیقه) محلول رویی با استفاده از پیپت پاستور جدا، به میکروتیوپ منتقل و تا زمان اندازهگیری در دمای 07- درجهی سانتیگراد نگهداری شد. برای هر بار آزمایش، از هر غلظت 5 کاپ گذاشته شد که در مجموع هر غلظت 52 بار تکرار شد.
انسولین با روش الایزا توسط کیت اختصاصی انسولین موش صحرایی موش صحرایی (شرکت Mercodia، سوئد)
اندازهگیری شد. ضریب تغییرات درونسنجی و برونسنجی روش به ترتیب 0/6 و 7/9 درصد بود.
یافتهها به صورت میانگین ± خطای استاندارد میزان انسولین ترشح شده از جزایر (میکرویونیت از هر جزیره لانگرهانس در واحد زمان) بیان شده است. با استفاده از نرمافزار SPSS برای بررسی وجود اختلاف معنیدار بین
زمانهای مختلف انکوباسیون از آنالیز واریانس دو طرفه و به منظور بررسی اختلاف بین نمونههای واجد یا فاقد آگونیست یا آنتاگونیست گابا از آنالیز واریانس یک طرفه به همراه آزمون توکی استفاده شد. مقدار p کمتر از 50/0 معیار
معنیدار بودن تفاوتها در نظر گرفته شد.
یافتهها
ترشح انسولین در زمانهای متفاوت انکوباسیون:
میزان ترشح انسولین در زمانهای مختلف انکوباسیون در دو غلظت گلوکز (3/8 و 7/61 میلیمولار) نشان میدهد که ترشح انسولین هم وابسته به دوز و هم وابسته به زمان است به طوری که میزان ترشح انسولین در حضور غلظت 3/8 میلیمولار گلوکز در زمانهای انکوباسیون 01، 02، 04، 06 و 09 دقیقه (که به ترتیب 8/0±52/2، 8/0±53/0، 78/1±79/21، 69/2±76/63 و 4/3±89/63 میکرو یونیت به ازای جزیره در دقیقه بود) در مقایسه با حضور غلظت 7/61 میلیمولار گلوکز (که به ترتیب 95/1±77/4، 79/1±38/6،
27/3± 82/14، 47/7±5/001 و 92/6±42/ 201 میکرویونیت به ازای جزیره در دقیقه بود) اختلاف معنیداری را نشان داد (در زمان 02 دقیقه 50/0 p< و در زمانهای 04، 06 و 09 دقیقه 100/0 (p< (نمودار 1). همچنین مقایسهی میزان ترشح
انسولین از جزایر لانگرهانس در زمانهای انکوباسیون مختلف در حضور هر یک از غلظتهای گلوکز (3/8 و 7/61 میلیمولار)، اختلاف معنیداری را نشان داد (برای زمانهای 04، 06 و 09 دقیقه در مقایسه با زمان 01 دقیقه 100/0(p<
(نمودار 1).
† † 120 (uU/islet/min)
Glucose 8.3 mM 100
Glucose16.7 mM
80
† 60 put
40 out
Insulin
20
0
90 60 40 20 10
Time (min)
نمــودار 1- ترشــح انــسولین از جزایــر لانگرهــانس در زمانهای مختلف انکوباسیون در حضور غلظت های3/8 و 7/61 میلیمولار گلـوکز .( : تفـاوت معنـیدار نـسبت بـه غلظــت 3 /8 میلــیمــولار گلــوکز (50 /0 (p< و :† تفــاوت معنـیدار نــسبت بــه زمـان 01 دقیقــه انکوباســیون ( 100 /0(p<
اثر گابا در زمانهای مختلف در حضورگلوکز: مقایسهی
اثر گابا در زمانهای01، 02، 04، 06 و 09 دقیقه به طور جداگانه بر میزان ترشح انسولین از جزایر لانگرهانس در حضور غلظتهای مختلف گلوکز (3/8 و 7/61میکرو مولار) نشان داد که ترشح انسولین در حضور غلظت 3/8 میلیمولار گلوکز و 05 میکرو مولار گابا در زمانهای 01، 02، 04، 06 و 09 دقیقه به ترتیب 71/0±63/0، 61/0±13/0، 78/1±79/21، 24/2±97/13 و 89/2±72/13 (نمودار 2) و برای 7/61 میلیمولار گلوکز در حضور 05 میکرو مولار گابا 3/1±92/3، 69/0±99/2، 13/3±28/04، 42/6±76/87 و 36/6±15/301 میکرو یونیت به ازای جزیره در 06 دقیقه بود (نمودار 3). در این آزمون ترشح انسولین در حضور گابا (05 میکرومولار) در مقایسه با حضور گلوکز (3/8 و 7/61 میلیمولار) به
26 مجلهی غدد درونریز و متابولیسم ایران دورهی دهم, شمارهی 1، اردیبهشت 7831
تنهایی در زمان 06 دقیقه کاهش معنیداری را نشان داد
(50/0 ( p< (نمودارهای 2 و 3).
دانلود این فایل